Zellspezifische Proteintoxine haben durch die Möglichkeiten, das therapeutische Fenster zu vergrößern und die systemische Toxizität zu senken, zunehmendes Interesse in der Krebstherapie geweckt. Aufgrund limitierender Toxizität in eukaryotischen Expressionssystemen, beruhten die meisten Anwendungen bisher auf der Fusion von Antikörperfragmenten mit Toxinen, die in Bakterien, wie Escherichia coli (E. coli) hergestellt werden können. Diesen Fusionen fehlen jedoch häufig nützliche Eigenschaften von Volllängenantikörpern, wie eine verlängerte Serumhalbwertszeit oder effiziente endosomale Aufnahme durch Rezeptorgruppierung. Ziel dieser Arbeit war die Herstellung neuartiger Immuntoxine, bestehend aus Volllängenantikörpern und verschiedenen Proteintoxinen, durch Proteinspleißen in trans mit geteilten Inteinen. Zunächst wurde die Toxinexpression durch Optimierung verschiedener Parameter, wie Expressionsstamm, Induktionskonditionen und Fusionspartnern, verbessert. Das pflanzliche Gelonin und das bakterielle Pseudomonas Exotoxin A wurden dafür in E. coli produziert. Fusionen mit Thioredoxin und Maltosebindeprotein erzielten reproduzierbare und akzeptable Ausbeuten. Der HER2 bindende Antikörper Trastuzumab wurde als Modell für therapeutisch relevante und gut beschriebene Antikörper verwendet. Zusätzlich wurde ein, aus zwei EGFR bindenden VHH Domänen bestehender, Antikörper entwickelt, welcher nur aus einer schweren Kette besteht. Beide Antikörper wurden in Säugetierzellen in guten Ausbeuten produziert. Ein geteiltes Intein wurde verwendet, um Antikörper und Toxine zu verbinden und daraus biologisch aktive Immuntoxine zu generieren. Der kurze (11 Aminosäuren) N-terminale Teil des aus Ssp DnaB evolvierten M86 Inteins wurde rekombinant an die Antikörper fusioniert, während der längere (143 Aminosäuren) Teil an die Toxine fusioniert wurde. Durch das Mischen der beiden Reaktionspartner konnte sich das Intein in seine aktive Form falten und das Spleißen ausführen. Die Reaktionsbedingungen wurden in diversen in vitro Reaktionen getestet und optimiert. Zu ihnen gehörten die Konzentration des Reduktionsmittels, die Reaktionszeit und der Aggregationsstatus der Toxine. Beide Antikörper konnten mit Spleißeffizienzen von 50 – 70 % erfolgreich mit Gelonin und Exotoxin A verbunden werden. Diese Immuntoxine wurden durch Protein A und immobilisierte Metallaffinitätschromatographie gereinigt. Die Endkonstrukte waren durch ein Toxin/Antikörper Verhältnis von 1,3 gekennzeichnet und wurden daraufhin detaillierter analysiert. Die spezifische Zellbindung konnte bei allen Immuntoxinen bestätigt werden. Außerdem wurde die enzymatische Aktivität von Gelonin in einem in vitro Translationsversuch bestätigt. Konfokalmikroskopie wurde angewandt, um die endosomale Aufnahme, die dort stattfindende Spaltung eines proteaselabilen Linkers und die anschließende Translokation des Toxins ins Zytoplasma zu bestätigen. Alle Immuntoxine Abstract 2 zeichneten sich in Zelltoxizitätsexperimenten auf verschiedenen Zelllinien durch IC50 Werte im mittleren pikomolaren bis hohen femtomolaren Bereich aus, wodurch sie zu den potentesten bisher publizierten Immuntoxinen gehören.