In den letzten Jahren wurde die gezielte Genintegration (targeted integration; TI) als Strategie zur Herstellung rekombinanter Säugetierzelllinien für die Produktion von Biotherapeutika eingeführt. Neben der Verringerung der potenziell immensen Heterogenität innerhalb eines Pools rekombinanter Transfektanten zielt die TI auch darauf ab, die Dauer des Zelllinienentwicklungsprozesses zu verkürzen. Ziel dieser Arbeit war es, eine Wirtszelllinie zu generieren, die mehrere Kopien einer Matrix Attachment Region (MAR) enthält, die als Zielregion für die ortsspezifische Integration von Transgenen dient. Das entwickelte System basiert auf der Integration von zwei Landestellen, die dieselbe MAR, zwei orthogonale Rekombinationsstellen für die Serin-Integrase BxB1 (AttB Wildtyp und AttB mit GA-Mutation) und zwei verschiedene Fluoreszenzreportergene (EGFP und DsRed) enthalten. Der erste Teil der Arbeit konzentrierte sich auf die Herstellung von Landestellen-Wirtszelllinien. Es wurden drei verschiedene Typen von dualen Landestellen entwickelt und in das CHO-S-Genom integriert: solche, die die 5'-MAR von Hühnerlysozym enthalten, solche, die die menschliche 1-68-MAR enthalten, und eine Kontrollzelllinie ohne eine MAR-Sequenz. Klone, die beide Landestellen integrieren, können durch antibiotische Selektion und durch parallele Erfassung der Expression der beiden Reportergenen ausgewählt werden. Die Landestellen-Klone wurden ausgewählt und charakterisiert, um die Auswirkungen der MAR-Sequenz auf die Anzahl der in das Genom integrierten LP-Kopien, die Expression der Reportergene und die Stabilität der Klone zu bewerten. Der zweite Teil der Arbeit konzentrierte sich auf die ortsspezifische Integration von GOI in die ausgewählten Wirtszelllinien unter Verwendung der BxB1-Intregase. Die Sequenz eines monospezifischen menschlichen Antikörpers (msAb-Fer) wurde für diesen Konzeptnachweis verwendet. Um das System weiter zu validieren und seine Vielseitigkeit zu demonstrieren, wurde auch ein bispezifischer Antikörper (bsAb-Fer) mit Hilfe des Landestellensystems exprimiert. Es wurden Klone ausgewählt und analysiert, um die erfolgreiche Integration der Donor-Vektoren und ihre korrekte Expression zu überprüfen. Diese Experimente verdeutlichten die Möglichkeit, das entwickelte Landestellen-System als "Chassis" für die Expression verschiedener Gene zu nutzen. Darüber hinaus wurden verschiedene Erkenntnisse über Punkte gewonnen, die optimiert werden müssen, um eine robustere Expressionsplattform zu erhalten. Der letzte Teil dieser Arbeit konzentrierte sich auf die Verbesserung der Kulturbedingungen im Fed-Batch-Verfahren und einen Scale-up der Kultur. Es wurden verschiedene kommerzielle Basalmedien in Kombination mit unterschiedlichen Fütterungsstrategien getestet, um die Auswirkungen auf die Zellwachstumskurven und den Antikörpertiter zu untersuchen. Durch die Verbesserung der Kulturbedingungen konnten die Kulturdauer und der Antikörpertiter im Vergleich zu den ursprünglich getesteten Bedingungen deutlich erhöht werden. Die besten Bedingungen wurden beim Scale-up des Systems verwendet, das sich in einem Schüttelbioreaktor von bis zu 5 Liter bewährt hatte. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass durch diese Arbeit Methoden für die Umsetzung und Entwicklung einer Plattform für die Simultanexpression mehrerer Zielgene entwickelt werden konnten. Das duale Landestellen-System, das aus verschiedenen Reportergenen und einer MAR-Sequenz besteht, ermöglicht die effiziente Auswahl stabiler Wirtszelllinien. Das Landestellen-Design in Verbindung mit der Promotor Trap Strategie ermöglicht eine effiziente und schnelle Selektion von produktiven Klonen, sobald die Rekombination und Integration der GOI stattgefunden hat. Dieses System hat sich sowohl für die Expression von einem monospezifischen und einem bispezifischen Antikörper bewährt, hat aber auch das Potenzial für eine schnelle und effiziente Expression anderer Moleküle. Daher könnte dieses System nach seiner Optimierung in Zukunft für die Erzeugung stabiler Zelllinien für die Produktion, aber auch für die schnelle Expression verschiedener Biologika verwendet werden, ohne dass transiente Transfektionsschritte oder lange Selektionsprozesse erforderlich sind.