Molekulare Mechanismen, die zu Veränderungen von Chromosomen-Telomeren führen, spielen eine wesentliche Rolle bei der Entstehung chromosomaler Instabilität. Telomere verkürzen sich mit jeder Zellteilung, was beim Erreichen einer kritischen Länge zu replikativer Seneszenz oder Apoptose der Zelle führt. In Tumorzellen wird diese gegen unbegrenztes Wachstum gerichtete Kontrolle durch Telomer-erhaltende Mechanismen(engl.: Telomere Maintenance Mechanismen = TM-Mechanismen) aufgehoben. Zu den bekannten TM-Mechanismen zählen die Telomerase-Aktivierung (TA) und der alternative Längenerhalt von Telomeren (ALT = Alternative lengthening of telomeres). Primäres Ziel dieser Arbeit war die Bestimmung der Häufigkeitsverteilung des TA- und des ALT-Mechanismus in einem umfassenden Kollektiv an Weichteilsarkomen welches in vorangegangenen Projekten, pathologisch, molekular-genetisch und klinisch eingehend unter anderem hinsichtlich ihrer chromosomalen Veränderungen untersucht wurde. Ein Schwerpunkt der hier beschriebenen Arbeit lag zunächst in der Etablierung der Methoden zur Detektion des ALT-Mechanismus. Die hierzu am häugsten verwendeten Marker sind zum einen Kolokalisationen zwischen Telomeren und PML-Kernkörperchen (PML: Promyelozytische Leukämie), auch ALT-assoziierte PML-Kernkörperchen (APBs) genannt, und zum anderen die Heterogenität in der Größe der Telomere mit dem zusätzlichen Auftreten von extrem großen Telomeren-Signalen. Hierzu wurde zunächst ein Protokoll für eine kombinierte Telomere Fluoreszenz in situ Hybridisierung (Detektion: Telomere) mit anschließender Immunuoreszenz (Detektion: PML-Kernkörperchen) etabliert. Für die in diesem Zusammenhang erstellten konfokalen Aufnahmen wurde ein Programm zur automatischen Auswertung der Marker des ALT-Mechanism entwickelt. Für die Bestimmung der Telomerase-Aktivität wurde das TRAP-Verfahren (Telomeric Repeat Amplification Protocol) verwendet. Diese Daten wurden anschlieÿend vergleichend mit den Daten der chromosomalen Veränderungen in Bezug gesetzt. Die Studie sollte die Häugkeitsverteilung von TM-Mechanismen in Weichteilsarkomen ermitteln und klären, ob diese mit spezifischen chromosomalen Imbalancen assoziiert sind. Die wichtigsten Ergebnisse dieser Arbeit lauten: 1. Das Auftreten der Telomer-erhaltenden Mechanismen ist stark von den einzelnen Weichteilsarkom-Subtypen abhängig. Telomerase-Aktivität variiert von 100% in synovialen Sarkomen bis hin zu 46% in pleomorphen Liposarkomen. Das Auftreten der Marker die den ALT-Mechanismus charakterisieren, sind ebenso mit den verschiedenen Weichteilsarkom-Subtypen assoziiert. Während in synovialen Sarkomen keine sehr groÿe Telomere-Signale detektiert werden konnten, liegt dieser Anteil bei pleomorphen Liposarkomen bei 92%. Die Korrelation beider Telomer-erhaltenden Mechanismen hat ergeben, dass die Anzahl der Kolokalisationen zwischen Telomeren und PML-Kernkörperchen als auch die der sehr groÿen Telomer-Spots mit der Höhe Telomerase-Aktivität assoziiert ist. 2. Neben Tumorgewebe wurde in dieser Arbeit auch ein umfangreiches Kollektiv von gesundem Gewebe auf Indikatoren des ALT Mechanismus untersucht. Die Ergebnisse der automatischen Analyse zeigen im gesunden Gewebe ebenso wie im Tumorgewebe das Auftreten von Kolokalisationen zwischen Telomeren und PML-Kernkörperchen. Im Vergleich zu Tumorgewebe konnten jedoch in gesundem Gewebe keine übergroßen Telomer-Spots detektiert werden. Diese Analyse stellt APBs als quantitativen Marker für den ALT-Mechanismus in Frage. Das Auftreten von sehr großen Telomere-Signalen wurde nur in Tumorgewebe gefunden wurde. 3. Die vergleichende genomische Hybridisierung (CGH) stellt einen Ansatz dar, mit welchem ein robuster Nachweis von chromosomalen Imbalancen aufgezeigt werden kann. Die Korrelation der CGH-Daten mit den Telomere-erhaltenden Mechanismen gibt keinen Hinweis darauf, dass bei einem der Mechanismen präferenziell mehr chromosomale Imbalancen auftreten. Die Analyse hat jedoch ergeben, dass Weichteilsarkome mit Telomerase-Aktivität ein dierenziertes zytogenetisches Profil gegenüber solchen Weichteilsarkomen mit Marker für den ALT-Mechanismus aufweisen. 4. Im Rahmen diese Arbeit wurde für die automatische Quantifizierung von Kolokalisationen aus konfokalen mikroskopischen Aufnahmen ein Computerprogramm entwickelt. Mittels dieses Programms können Indikatoren für den ALT Mechanismus wie ALT-assoziierte PML-Kernkörperchen und überdurchschnittlich große Telomere detektiert werden. Die Detektion der verschiedenen Marker innerhalb des Zellkerns, wird über die Kernsegmentierung ermittelt. Mit Hilfe der vollautomatischen Auswertung war es möglich über 500 konfokale mikroskopische Bilderstapel zu analysieren und auszuwerten. Die Charakterisierung von Tumoren spielt in der klinischen Diagnostik und in der Beurteilung von Therapie-Entscheidungen eine wichtige Rolle. Mit dem Auftreten der ALT-assoziierten PML-Kernkörperchen in gesundem Gewebe, muss in weiteren Studien geklärt werden, wie stark diese spezielle Kernstruktur direkt mit dem ALT-Mechanismus assoziiert ist. Die Charakterisierung von Telomere-erhaltenden Mechanismen und ihre Rolle in der Tumorgenese könnten die Basis für neue gezielte therapeutische Ansätze bilden.