Die humane Serinprotease HTRA1 spielt eine wichtige Rolle bei vielen verschiedenen physiologischen Prozessen. Sie ist dabei an der Erkennung und Prozessierung einer Vielzahl verschiedener Substrate beteiligt. Eine wachsende Zahl an Studien deutet darauf hin, dass HTRA1 bei der Entstehung oder Progression unterschiedlicher Krankheiten wie beispielsweise Arthrose, Krebs, altersbedingter Makulardegeneration oder Alzheimer eine Rolle spielt. Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung von Modulatoren, welche die Aktivität von HTRA1 beeinflussen, um dadurch Werkzeuge zur Validierung von HTRA1 als mögliches Zielmolekül für neue Therapieansätze zu generieren. Der ursprüngliche Ansatz war die Herstellung von Monomeren der multimeren Protease HTRA1, welche sich sowohl als Trimer, oder als höheres Oligomer von unbekannter Zusammensetzung, assembliert. Der erste Schritt zur Monomerisierung des Zielmoleküls sollte zu einem leicht handhabbaren und beherrschbaren Zielmolekül für das evolutive Proteindesign führen. Daher wurden Strukturdaten des Trimers genutzt um Aminosäureaustausche vorzunehmen, die als hauptursächlich für die Trimerisierung beschrieben wurden. Diese führten zu stabilen, monomeren Fraktionen der katalytischen Domäne von HTRA1. Proteinbibliotheken drei verschiedener Grundgerüste wurden für die Durchmusterung nach Bindern für monomeres HTRA1 eingesetzt. Die auf dem Miniprotein McoTI-II basierende Bibliothek, welches ein Trypsin Inhibitor aus Kürbisgewächsen ist, lieferte ein einzelnes Molekül, welches zwar mit nanomolarer Affinität monomeres HTRA1, aber nicht natives trimeres, erkannte. Ähnlich verhielten sich die beiden Moleküle, die aus einer immunisierten cameliden VHH Bibliothek, wobei es sich um die variable Domäne eines Einzelketten-Immunglobulins eines Lamas handelt, isoliert wurden. Hier erkannten ebenfalls beide Moleküle zwar das monomere HTRA1 mit nanomolaren Affinitäten, aber nicht das native, trimere. Bei der dritten Bibliothek handelte es sich um ein vNAR Grundgerüst, welches die variable Domäne eines Einzelketten-Immunglobulins von Haien darstellt, bei der CDR3 synthetisch randomisiert wurde. Bei der Durchmusterung wurden sechs Moleküle isoliert, die mikromolare Affinitäten gegenüber monomerem HTRA1 aufwiesen und von denen fünf auch natives, trimeres HTRA1 erkannten. Durch schrittweise Affinitätsmaturierung von CDR1 und HV2 konnten Affinitäten im zweistellig nanomolaren Bereich erzielt werden. Zuletzt wurden die erfolgversprechenden vNAR Varianten löslich exprimiert und in Aktivitätstests wurde überprüft, ob sie einen Einfluss auf die Aktivität von HTRA1 haben. Drei Moleküle erhöhten die Aktivität in einem Bereich von 150 % bis 400 %. Diese Modulatoren können für in vitro und in vivo Analysen eingesetzt werden und dazu beitragen die Frage zu beantworten, ob HTRA1 ein sinnvolles therapeutisches Ziel darstellt.