Lebewesen, wie auch der Mensch, sind in der Natur einer Vielzahl von schädlichen Substanzen ausgesetzt. Zum einen sind Schadsubstanzen natürlichen Ursprungs, zum anderen gelangen sie aufgrund anthropogener Wirkungen in die Biosphäre. Gegenüber organischen niedermolekularen Substanzen, die nicht für das Überleben des Organismus notwendig sind, wurden im Laufe der Evolution Mechanismen entwickelt, eine in den Körper aufgenommene Verbindung auszuschleusen. Häufig handelt es sich dabei um potentiell schädliche Chemikalien. Die Entgiftung lipophiler Fremdsubstanzen (Xenobiotika) kann in drei Phasen unterteilt werden. In der ersten Phase findet eine Funktionalisierung des Substrates statt. Dabei wird eine funktionelle Gruppe enzymatisch auf das Substrat übertragen. In der zweiten Phase wird das funktionalisierte Substrat mit einer endogenen Verbindung, wie z.B. Glutathion, konjugiert. Dadurch wird die Polarität und somit die Hydrophilie des Xenobiotikums erhöht. Dies vermindert das toxische Potential und ermöglicht die Ausscheidung (Phase III). Ein wichtiger Weg, über den lipophile Xenobiotika ausgeschleust werden können, ist der Mercaptursäureweg der Entgiftung. Im ersten Schritt erfolgt die Konjugation mit dem Tripeptid Glutathion. Das Glutathion-Konjugat wird in der Folge schrittweise enzymatisch zu einem Cystein-S -Konjugat hydrolysiert. Das Cystein-S -Konjugat ist das Substrat für die membrangebundene N ?Acetyl-S -Transferase (NAcT, EC 2.3.1.80), die Gegenstand der Untersuchungen dieser Arbeit ist. Das Cystein-S -Konjugat wird meist in der Niere acetyliert und über den Urin ausgeschieden. Es entsteht ein N ?Acetyl?Cystein?S ?Konjugat, das auch als Mercaptursäure bezeichnet wird. Viele technisch wichtige Substanzen gehören der Stoffklasse der Haloalkane oder Haloalkene an, die über den Mercaptursäureweg entgiftet werden. Dabei können aufgrund von Konkurrenzreaktionen (z. B. katalysiert durch b-Lyase) toxische und cancerogene Metabolite entstehen. Die Toxizität einer Verbindung ist somit ein Maß für das Gleichgewicht, das zwischen der Acetylierung und den Konkurrenzreaktionen besteht. Für Haloalkane bzw. Haloalkene ist deshalb die Kenntnis der kinetischen Konstanten Km und Vmax dieser Reaktionen von Bedeutung. Im Rahmen der Arbeit wurden die kinetischen Konstanten der N ?Acetylierung für verschiedene Haloalkyl- und Haloalkenyl-Cystein-S ?Konjugaten (von Dr. M. W. Anders, Rochester, NY zur Verfügung gestellt) bestimmt. Dazu wurde ein quantitativ auswertbarer, radioaktiver Aktiviätstest etabliert. Das Teilreinigungverfahren für die NAcT aus der Niere wurde optimiert und konkurrierende Enzymaktivitäten (Deacetylase, Acetyl-CoA Hydrolase) konnten vollständig, bzw. fast vollständig abgetrennt werden. Aus einer früheren Arbeit [Aigner, 1995] lagen Phagenklone vor, die bei Durchmusterung einer cDNA-Expressionsbank mit einem gegen NAcT-spezifischen Antikörper erhalten worden waren. Die DNA-Sequenzen dieser Klone wurden im Rahmen der vorliegenden Arbeit ermittelt. Gemeinsame Merkmale aller cDNA-Insertionen ist die Übereinstimmung mit Proteinen, die über eine ATP-Bindestelle verfügen und an DNA binden.