TU Darmstadt / ULB / TUprints

Optimierung der Astaxanthin-Synthese in Synechococcus sp. PCC7002 unter Zuhilfenahme synthetischer Biologie

Greulich, Simon (2024)
Optimierung der Astaxanthin-Synthese in Synechococcus sp. PCC7002 unter Zuhilfenahme synthetischer Biologie.
Technische Universität Darmstadt
doi: 10.26083/tuprints-00027857
Ph.D. Thesis, Primary publication, Publisher's Version

[img] Text
Dissertation_Greulich.pdf
Copyright Information: CC BY 4.0 International - Creative Commons, Attribution.

Download (4MB)
Item Type: Ph.D. Thesis
Type of entry: Primary publication
Title: Optimierung der Astaxanthin-Synthese in Synechococcus sp. PCC7002 unter Zuhilfenahme synthetischer Biologie
Language: German
Referees: Kaldenhoff, Prof. Dr. Ralf ; Kolmar, Prof. Dr. Harald
Date: 7 August 2024
Place of Publication: Darmstadt
Collation: 66 Seiten
Date of oral examination: 15 July 2024
DOI: 10.26083/tuprints-00027857
Abstract:

Weil fossile Rohstoffe endlich sind und deren Nutzung negativ auf den immer schneller voranschreitenden Klimawandel wirkt, ist es wichtig Alternativen zu finden. Eine derzeit schon genutzte Lösung stellen Produktionslinien gestützt auf Mikroorganismen dar. Diese benötigen jedoch Zucker für ihr Wachstum und die damit verbundene Produktion der gewünschten Güter. Zudem erzeugt der Metabolismus dieser Zellen CO2 im Unterschied zu photosynthetisch aktiven Mikroorganismen. Diese benötigen keinen Zucker für ihr Wachstum und produzieren darüber hinaus Sauerstoff. Eine klimaneutrale oder sogar klimapositive Produktion ist so möglicherweise erreichbar. Entsprechend werden Cyanobakterien derzeit intensiv erforscht. Sie sollen als Produktionsplattform für die Synthese verschiedenster Substanzen verwendet werden. Darunter sind Feinchemikalien, Medikamente oder Biotreibstoff. Jedoch scheitern viele dieser Ansätze derzeit an der zu geringen Ausbeute. Hier spielen die kostenintensive Ernte und Aufreinigung eine wichtige Rolle. Auch die Synthese von Astaxanthin ist aus diesem Grund oft nicht rentabel, obwohl die Substanz hochpreisig gehandelt wird und in der Pharma-, Lebensmittel- oder Kosmetikindustrie wegen starker antioxidativer Eigenschaften gefragt ist. Synechococcus sp. PCC7002 kann den Astaxanthin-Vorläufer β-Carotin produzieren, aber nicht Astaxanthin. Jedoch ist dieses Cyanobakterium leicht genetisch zu modifizieren und weist ein extremes Wachstum, mit einer minimalen Verdopplungszeit von 2,6 Stunden, auf. Unter Verwendung eines synthetischen Ketolase- und eines synthetischen Hydroxylase-Gens gelang die Modifizierung des Carotin-Stoffwechsels. Der Organismus war nun in der Lage Astaxanthin zu synthetisieren. Der zelluläre Gesamtgehalt an Astaxanthin wurde durch die Überexpression der intrinsischen Phytoen-Synthase weiter erhöht. Bei den Versuchen der Modifizierung des Carotinoid-Stoffwechsels zeigte sich, dass es mehr Regulationsmechanismen gibt als derzeit in der wissenschaftlichen Literatur bekannt sind. Darüber hinaus stellten sich gewisse durch die wissenschaftliche Literatur begründete Annahmen als falsch heraus. Bezüglich der Lösung des Problems der kostenintensiven Ernte und Extraktion, ermöglichte die Expression eines E. coli-ABC-Transporter den Export von Astaxanthin. Zugleich verringert dies die intrazelluläre Produktakkumulation. Auf diese Weise wurde die Synthese weiter gesteigert. Aus dem Kulturmedium können dann erhebliche Mengen Astaxanthin zurückgewonnen werden, ohne dass es einer Zerstörung der Zellen bedarf. Insgesamt ermöglichen die erzielten Erfolge, allen voran durch die erstmalige erfolgreiche Nutzung eines ABC-Transporters für den Export von Carotinoiden in photosynthetisch aktiven Mikroorganismen, eine gänzlich neue Produktionsstrategie. Der erzeugte Synechococcus sp. PCC7002-Stamm kann eine kontinuierliche Astaxanthin-Produktion gewährleisten, die ohne Ernte und Zerstörung der Zellen auskommt. Potenziell ergibt sich daraus eine klimaneutrale oder sogar klimapositive Produktionsplattform.

Alternative Abstract:
Alternative AbstractLanguage

As fossil Resourcs are finite and their use contributes to accelerating climate change, it is important to find alternatives. One solution already in use is production lines based on microorganisms. However, these require sugar to grow and produce the desired goods. In addition, the metabolism of these cells produces CO2, unlike photosynthetically active microorganisms. These do not require sugar to grow and also produce oxygen. Climate-neutral or even climate-positive production may therefore be achievable. Consequently, cyanobacteria are currently the subject of intensive research. As a production platform, they can be used to synthesise a wide range of substances. These include among other things chemicals, medicines, and biofuels. However, many of these applications are failing. The most important reasons are the low yield combined with costly harvesting as well as purification processes. For these reasons the synthesis of Astaxanthin is also often unprofitable, although the substance is traded at a high price and is in demand in the pharmaceutical, food and cosmetics industries due to its strong antioxidant properties. Synechococcus sp. PCC7002 is able to produce the astaxanthin precursor β-carotene but cannot produce astaxanthin. However, this cyanobacterium is easily genetically modified and exhibits extreme growth, with a minimum doubling time of 2.6 hours. Using a synthetic ketolase as well as a synthetic hydroxylase gene, the modification of the carotene metabolism was successful. Finally, the organism was able to synthesise astaxanthin. Total cellular astaxanthin content was further increased by the overexpression of the intrinsic phytoene synthase. Attempts to modify the carotenoid metabolism revealed that there are more regulatory mechanisms than currently known in the scientific literature. In addition, certain assumptions based on the scientific literature turned out to be incorrect. To overcome the problem of costly harvesting and extraction, the expression of an E. coli ABC transporter enabled the export of astaxanthin. At the same time the intracellular accumulation of the product was reduced. In this way synthesis was further enhanced. Consequently, substantial amounts of astaxanthin can then be recovered from the culture medium without the need to destroy the cells. Overall, a completely new production strategy is made possible by the successes achieved, the first successful use of an ABC transporter for the export of carotenoids in photosynthetic microorganisms. The Synechococcus sp. PCC7002 strain developed can ensure continuous astaxanthin production without harvesting and destroying the cells. This could potentially result in a climate-neutral or even climate-positive production platform.

English
Status: Publisher's Version
URN: urn:nbn:de:tuda-tuprints-278574
Classification DDC: 500 Science and mathematics > 570 Life sciences, biology
Divisions: 10 Department of Biology > Applied Plant Sciences
Date Deposited: 07 Aug 2024 12:29
Last Modified: 08 Aug 2024 07:39
URI: https://tuprints.ulb.tu-darmstadt.de/id/eprint/27857
PPN: 520410300
Export:
Actions (login required)
View Item View Item