Bispezifische Antikörper können verschiedene molekulare Architekturen umfassen, um Wirkungsmechanismen zu erzeugen, die durch monospezifische Antikörper nicht adressiert werden können. Diese Wirkungsmechanismen beinhalten unter anderem die Rekrutierung von Effektorzellen oder die erhöhte Selektivität durch zielgerichtete gleichzeitige Bindung von zwei Antigenen. Die Antikörperforschung in der Pharmaindustrie ist in den letzten Jahren kontinuierlich gewachsen, besonders bispezifische Antikörper mit ihren besonderen Eigenschaften stehen im Fokus. Allerdings ist deren Entwicklung sehr herausfordernd, da die optimale Kombination aus zwei ursprünglich monospezifischen Antikörpern gefunden werden muss. Daher kommt es zu unerwünscht verlängerten Entwicklungszeiten und erhöhtem Kostenaufwand. Für Identifikation und Charakterisierung von Kleinmolekülen und klassischen monoklonalen Antikörpern ist mittlerweile das Hochdurchsatz-Durchmustern eine ausgereifte Disziplin. Die Bereitstellung der sehr hohen Anzahl möglicher bispezifischer Kombinationen für ein solches Vorgehen stellt bis jetzt jedoch einen sehr limitierenden Faktor dar. Es kann nur ein kleiner Teil des zu durchmusternden Raumes abgedeckt werden, da die verschiedenen Kombinationen erst aufwendig einzeln neu kloniert, exprimiert und gereinigt werden müssen. In der vorliegenden Studie wird daher ein neuartiger Hochdurchsatz-Durchmusterungsansatz für bispezifische Antikörper vorgestellt, der diese Limitierungen umgeht und den Durchmusterungsraum um ein Vielfaches erweitert. Er basiert auf der Fähigkeit des Split Inteins Npu DnaE, Proteine in-trans zu spleißen. Antikörperfragmente werden dabei in der Hinge-Region an einen Teil des jeweiligen Split Inteins fusioniert, um die zwei Fragmente so in vitro kombinatorisch ligieren zu können. Diese Methode erlaubt die Rekonstitution einer großen Anzahl verschiedenster bispezifischer Antikörper in kürzester Zeit unter voll automatisierten Bedingungen ohne aufwendige Einzelklonierungen und Herstellungsarbeiten. Verschiedene in dieser Arbeit durch Rekonstitution hergestellte Antikörper zeigen im Vergleich zu genetisch fusioniert hergestellten Referenzen durchweg vergleichbare Bindeverhalten und funktionelle Eigenschaften. Die erarbeitete Rekonstitutionsmethode ist außerdem voll implementierungsfähig für automatisierte HochdurchsatzDurchmusterung. Eine potenzielle Hochdurchsatz Zugänglichkeit für 96-Well und 384-Well Platten wurde untersucht und bestätigt und diente als konzeptioneller Beweis für die Funktionsfähigkeit der Methode. FabFragmente wurden mit verschiedenen Fc-Fragmenten kombiniert, als beispielhafte Screening Anwendung für einen schnellen Wechsel der Effektor-Funktion von monoklonalen als auch bispezifischen Antikörpern. Die beschriebene Methode könnte es ermöglichen, bispezifische Antikörper im Hochdurchsatz auf Bindung und zelluläre Funktionalität zu screenen, um die Entwicklungszeiten stark zu verkürzen und die Wahrscheinlichkeit eine optimale bispezifische Kombination zu finden, erhöhen. Diese Methode dient letztlich zur Herstellung besserer Biotherapeutika.