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Isolierung und Charakterisierung von Einzeldomänen-Antikörpern durch mikrobielle Oberflächenpräsentation molekularer Bibliotheken

Steinmann, Björn :
Isolierung und Charakterisierung von Einzeldomänen-Antikörpern durch mikrobielle Oberflächenpräsentation molekularer Bibliotheken.
Technische Universität, Darmstadt
[Ph.D. Thesis], (2015)

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Item Type: Ph.D. Thesis
Title: Isolierung und Charakterisierung von Einzeldomänen-Antikörpern durch mikrobielle Oberflächenpräsentation molekularer Bibliotheken
Language: German
Abstract:

Die Dissertationsschrift umfasst die Arbeiten zur Erstellung und Durchmusterung von kameliden VHH-Antikörperbibliotheken (variable chain of a heavy-chain of a heavy-chain antibody) aus Lama glama mittels Phagen- und Hefe-Oberflächenpräsentation. Dabei werden zunächst die Probenentnahme am Versuchstier, die Aufbereitung der Blutproben sowie die Extraktion der genetischen Information für das VHH-Antikörperrepertoire beschrieben. Durch Anwendung geeigneter Klonierungs- und Rekombinations-Methoden konnten daraus erfolgreich verschie-dene VHH-Antikörper-Plattformen erstellt werden. Dabei wurde sowohl ein naives VHH-Repertoire aus einer Population von adulten Tieren, als auch ein durch Immunisierung affini-tätsgereiftes Repertoire eines einzelnen Tieres eingesetzt und bezüglich ihres Potentials, anti-genspezifische VHH-Antikörper isolieren zu können, untersucht. Beide Repertoires wurden in eine Hefe-Durchmusterungsplattform integriert und mehrfach erfolgreich nach Bindemolekülen durchmustert. Das naive Repertoire wurde zusätzlich für die Erstellung einer Phagen-Bibliothek eingesetzt und ebenfalls erfolgreich für die Durchmusterung eingesetzt.

Alternative Abstract:
Alternative AbstractLanguage
The thesis investigates the generation and screening of camelid VHH antibody libraries (variable chain of a heavy-chain of a heavy-chain antibody) from Lama glama by phage and yeast display. First, the blood sample collection, the sample processing, and the extraction of the genetic information for the VHH antibody repertoire has been described. By using appropriate cloning and recombination methods, different VHH antibody platforms were generated. Therefore, a naïve as well as an immune maturated repertoire has been used. Both repertoires were integrated into a yeast display platform and successfully screened several times for target specific binding molecules. The naïve repertoire was also used for the generation of a phage display library, which has also been screened successfully for antigen-specific VHH molecules.English
Place of Publication: Darmstadt
Classification DDC: 500 Naturwissenschaften und Mathematik > 500 Naturwissenschaften
500 Naturwissenschaften und Mathematik > 570 Biowissenschaften, Biologie
Divisions: 07 Fachbereich Chemie
Date Deposited: 26 Feb 2015 07:21
Last Modified: 26 Feb 2015 07:21
URN: urn:nbn:de:tuda-tuprints-44026
Referees: Kolmar, Prof. Dr. Harald and Neumann, Prof. Dr. Siegfried and Göringer, Prof. Dr. H. Ulrich and Layer, Prof. Dr. Paul G.
Refereed: 15 December 2014
URI: http://tuprints.ulb.tu-darmstadt.de/id/eprint/4402
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