Sactipeptide sind eine kleine, aber wachsende Klasse von ribosomal synthetisierten und posttranslational modifizierten Peptiden (RiPPs), die durch einzigartige Cystein-Schwefel-α-Kohlenstoff-Querverbindungen gekennzeichnet sind. Dieses Thioether-Muster zwischen den Donor-Cystein-Seitenketten und den entsprechenden Akzeptor Aminosäuren, das durch so genannte Sactisynthasen katalysiert wird, verleiht den Sactipeptiden eine erhöhte strukturelle, thermische und proteolytische Stabilität sowie eine starre Struktur. Diese Eigenschaften machen diese einzigartigen biologischen Gerüste sehr attraktiv für die Entwicklung neuer Biotherapeutika. Ziel dieser Arbeit war es, die Substrat-Promiskuität der Sactisynthase AlbA aus dem Subtilosin A Gencluster im Detail zu analysieren. Insbesondere wurde die Fähigkeit der Sactisynthase untersucht, größere Substitutionen und Insertionen in Subtilosin A zu tolerieren. Besonders die Bildung dieser so genannten Sactioninbrücken wurde untersucht. Um diese exotischen Gerüste zu analysieren, wurden die entworfenen Sactipeptidvarianten in E. coli BL23(DE3) exprimiert. Im ersten Teil der Arbeit wurde die Fähigkeit von AlbA untersucht, nicht-native Sactipeptide zu modifizieren. Zu diesem Zweck wurden zwei Strategien verfolgt und die Sactisynthase modifizierte erfolgreich zwei unbekannte Sactipeptide, wenn auch mit einer geringeren Effizienz. Darüber hinaus wurden Sactipeptid-Hybridpeptide, die aus den Donor- und Loop-Regionen von Subtilosin A und der C-terminalen Akzeptor Region von vier verschiedenen Typ-I-Sactipeptiden bestanden, entworfen und mittels Massenspektrometrie analysiert. Diese Ergebnisse gaben Aufschluss über die regioselektive Aktivität von AlbA. Im zweiten Teil der vorliegenden Arbeit wurde die Fähigkeit von AlbA analysiert, größere Aminosäuresequenzen in der Schleifenregion von Subtilosin A zu tolerieren. Dadurch konnte eine Position in der Schleifenregion von Subtilosin A identifiziert werden, in die verschiedene Sequenzen eingeführt werden konnten, ohne die von AlbA vermittelten posttranslationalen Modifikationen zu behindern. Die Anzahl der eingebauten Thioetherbrücken variierte je nachdem, ob die eingebauten Sequenzen eine der beiden Anforderungen erfüllten: (i) eine relativ kurze Sequenz oder (ii) eine strukturell vormontierte Sequenz. Der dritte Teil der Arbeit war der Funktionalisierung des Sactipeptids Subtilosin A gewidmet. Nach der erfolgreichen Einführung biologisch aktiver Sequenzen in die identifizierte Position in der Schleifenregion des Sactipeptids, wurden die biologischen Eigenschaften der erzeugten Thioether verbrückten Subtilosin A Varianten anschließend genauer analysiert. Zusammenfassend kann gesagt werden, dass spezifische Rezeptor- und Taschenbindungsaktivitäten sowie eine Protease inhibitorische Eigenschaft erfolgreich eingeführt wurden, die jedoch eine eingeschränkte biologische Aktivität zeigten. In der vorliegenden Proof-of-Concept Arbeit wurde eine Strategie etabliert, die die Funktionalisierung des Sactipeptids Subtilosin A ermöglichte. Zukünftige Studien werden die Durchführbarkeit dieser Strategie für die Funktionalisierung anderer Sactipeptide untersuchen und prüfen, ob maßgeschneiderte Subtilosin A Varianten mit verbesserten biologischen Eigenschaften entwickelt werden können.